疏水相互作用色谱和亲和色谱的异同？
疏水作用层析（Hydrophobic Interaction Chromatography，HIC）是根据分子表面疏水性差别来分离蛋白质和多肽等生物大分子的一种较为常用的方法。蛋白质和多肽等生物大分子的表面常常暴露着一些疏水性基团，我们把这些疏水性基团称为疏水补丁，疏水补丁可以与疏水性层析介质发生疏水性相互作用而结合。不同的分子由于疏水性不同，它们与疏水性层析介质之间的疏水性作用力强弱不同，疏水作用层析就是依据这一原理分离纯化蛋白质和多肽等生物大分子的。反向液相色谱RPC一般用非极性固定相（如C18、C8）；流动相为水或缓冲液，常加入甲醇、乙腈、异丙醇、丙酮、四氢呋喃等与水互溶的有机溶剂以调节保留时间。它是根据被测组分离子与离子对试剂离子形成中性的离子对化合物后，在非极性固定相中溶解度增大，从而使其分离效果改善。疏水作用层析：溶液配置简单，性状温和，能保持蛋白活性，但操作复杂，分离效率低如果你认可我的回答，敬请及时采纳，~如果你认可我的回答，请及时点击【采纳为满意回答】按钮~~手机提问的朋友在客户端右上角评价点【满意】即可。~你的采纳是我前进的动力~~O(∩_∩)O，记得好评和采纳，互相帮助。
dpph自由基清除原理
dpph自由基清除原理：DPPH自由基有单电子在517nm处有一强吸收其醇溶液呈紫色的特性，结论， DPPH法名称:1，它的稳定性主要来自3个苯环的共振稳定作用及空间障碍。中文名：22联氮二(3乙基苯并噻唑6磺酸)二铵盐别名：22’连氮基双(3乙基苯并二氢噻唑啉6磺酸)分子式：C18H24N6O6S4分子量：54868ABTS法是使用最广泛的间接检测方法，当有自由基清除剂存在时由于与其单电子配道对而使其吸收逐渐消失其褪色程与其接受的。dpph性质应用：DPPH具有几个不同结晶形态，它们的晶格对称性和熔点(m.p.)存在差异。商品化的粉末是不同晶相的混合物，熔点在130℃附近。DPPH-Ⅰ(m.p. 106℃)是正交晶系，DPPH-Ⅱ(m.p. 137℃)是无定形态，DPPH-Ⅲ(m.p. 128-129℃)是三斜晶系。DPPH是一种很稳定的氮中心的自由基，它的稳定性主要来自3个苯环的ππ共-轭作用及空间障碍，使夹在中间的氮原子上不成对的电子不能发挥其应有的电子成对作用。作为一种稳定的自由基，DPPH可以捕获("清除")其他的自由基。因此通过加入DPPH后观察某一化学反应的速率是否减慢，来作为这一反应是否具有自由基反应本质的指标。由于DPPH自由基在以300~400之间为中心处具有强烈的吸收，因此在溶液中呈现深紫色，并且在被中和之后会变为无色或浅黄色。利用这一特性可以直观地检测反应的过程，通过记录DPPH在在520nm吸光度值或者EPR信号的变化可以得到初始自由基的量。
dpph法测抗氧化性原理
DPPH法是一种常用的测定食品、药品等样品抗氧化性的方法。其原理是基于DPPH自由基与抗氧化剂的反应，通过比较DPPH自由基还原前后的吸光度变化来评估样品的抗氧化能力。DPPH（2,2-二苯基-1-苦味肼）是一种紫色自由基，其分子中包含一个未成对电子，具有很强的吸收能力。当DPPH与抗氧化剂发生反应时，未成对电子被转移给抗氧化剂，DPPH自由基减少而呈现出淡黄色或无色，吸光度也随之降低。通过测定反应前后DPPH自由基的吸光度差异，可以计算出样品的抗氧化能力。DPPH法的具体实验步骤如下：准备样品：将待测样品溶解或悬浮在适当的溶剂中，以便进行后续的反应。预处理DPPH溶液：将DPPH粉末溶解在适当的溶剂中，使得其吸光度在515 nm左右为1.0 ± 0.1。反应：将待测样品加入预处理好的DPPH溶液中，使其充分反应。测定吸光度：将反应后的混合液吸入分光光度计中，测定其在515 nm处的吸光度。计算抗氧化能力：通过比较反应前后DPPH溶液的吸光度差异，计算出样品的抗氧化能力。通常情况下，样品的抗氧化能力越强，其与DPPH反应后DPPH溶液的吸光度下降越大，吸光度差值越大。因此，DPPH法可以用于快速评估不同食品、药品等样品的抗氧化能力，并可以用于筛选和优选具有较强抗氧化能力的物质。
dpph法测抗氧化性实验步骤
清除DPPH自由基能力的测定称取一定量的DPPH，用无水乙醇配制成0.04mg/mL的DPPH溶液。分别取2mL不同浓度（2，4，6，8mg/mL）的溶液，加入2mL DPPH溶液，混合均匀，室温放置30min后，5000r/min离心10min。取上清液于517nm处测吸光值。用Vc作为阳性对照。样品对DPPH自由基的清除率用以下公式计算： DPPH A0—2mL无水乙醇+ 2mL DPPH溶液的吸光值； A1—2mL样品溶液+ 2mL DPPH溶液的吸光值； A2—2mL样品溶液+ 2mL无水乙醇的吸光值。对Fe2+离子螯合能力的测定分别取1mL不同浓度（2，4，6，8mg/mL）的溶液和3.7mL蒸馏水，加入2mmol/L的FeCl2溶液0.1mL和5mmol/L的菲洛嗪溶液0.2mL，25℃水浴10min，于562nm处测吸光值。EDTA为阳性对照。样品对Fe2+的螯合率计算公式如下： Fe2+A0—1mL蒸馏水代替反应体系中样品溶液后的吸光值； A1—样品溶液反应后的吸光值； A2—0.1mL的蒸馏水代替反应体系中O
